大鼠elisa試劑盒操作步驟詳解

　　大鼠elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)樣本中大鼠TNF-α的濃度。大鼠TNF-α捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)本或參考品時(shí)，其中的大鼠TNF-α會(huì)與捕獲抗體結(jié)合，其它游離的成分通過(guò)洗滌的過(guò)程被除去。當(dāng)加入生物素化的抗大鼠TNF-α抗體后，抗大鼠TNF-α抗體與大鼠TNF-α接合，形成夾心的免疫復(fù)合物，其它游離的成分通過(guò)洗滌的過(guò)程被除去。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親合素。

　　生物素與親合素特異性結(jié)合，親合素連接的酶就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)；其它游離的成分通過(guò)洗滌的過(guò)程被除去。加入顯色劑，若樣本中存在TNF-α將會(huì)形成免疫復(fù)合物，辣根過(guò)氧化物酶會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)，讀其450nm處的OD值，大鼠TNF-α濃度與0Dm值之間呈正比，通過(guò)參考品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，對(duì)照未知樣本中0D值，即可算出標(biāo)本中TNF-α濃度。

　　大鼠elisa試劑盒操作步驟：

　　1.通過(guò)計(jì)算并確定一次性實(shí)驗(yàn)所需的板條數(shù)，取出所需板條放置在框架內(nèi)，暫時(shí)用不到板條請(qǐng)放回鋁箔袋密封，保存于4℃。

　　2.建議設(shè)置本底較正孔，即空白孔，設(shè)置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實(shí)驗(yàn)均需做標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照并畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

　　3.分別將標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品（100u1/孔）加入相應(yīng)孔中，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫孵育120分鐘。對(duì)于血清或血漿標(biāo)本，請(qǐng)加入50u1樣本分析緩沖液后加50u1標(biāo)本，如稀釋量大，請(qǐng)將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)充至100ul。

　　4.洗板5次，且置厚吸水紙上拍干。

　　5.加入生物素化抗體工作液（100u1/孔）。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫孵育60分鐘。

　　6.洗板5次，且置厚吸水紙上拍干。

　　7.加入酶結(jié)合物工作液（100u1/孔）。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，避光室溫孵育20分鐘。

　　8.洗板5次，且置厚吸水紙上拍干。

　　9.加入顯色劑TMB100u1/孔，避光室溫孵育20分鐘。

　　10.加入終止液50u1/孔，混勻后即刻測(cè)量0D450值。