定量PCR檢測試劑盒實驗方法

　　定量PCR檢測試劑盒常用于熒光免疫法中標記抗原或抗體，亦可用于微環境，如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質活性位點等處微觀特性的探測。通常要求探針的摩爾吸光系數大，熒光量子產率高；熒光發射波長處于長波且有較大的斯托克斯位移；用于免疫分析時，與抗原或抗體的結合不應影響它們的活性。
 

　　定量PCR檢測試劑盒實驗方法：
 

　　1.取增菌液1ml加到l.5ml無菌離心管中，10，000rpm離心5min，棄去上清；加入50ulDNA提取液，充分混勻后沸水浴5min，13000rpm離心5min，取上清液進行檢測或保存于-20C以待檢測。
 

　　2.將PCR反應液置室溫平衡，融化后取Taq酶，按2U/管加入Taq酶，即每個測試反應體系配制為：PCR反應液22.5ul+0.4u1Taq酶。
 

　　3.加入模板：將保存在-20C的核酸提取物置室溫解凍，以13000rpm離心5min。陰、陽性對照使用前置室溫解凍。在每個PCR反應管中分別加入步驟1中處理過的模板或陰、陽性對照各2u1，蓋好管蓋，置于PCR儀上，記錄相應樣品號。
 

　　4.上機擴增、檢測區：反應條件為95C：3min，1個循環；95C：5sec，60C：40sec(信號采集)，40個循環。反應體系設為25u1。對于多通道熒光PCR儀，信號采集時設定為Fam熒光素。
 

　　定量PCR檢測試劑盒使用注意事項：
 

　　1.本試劑盒僅用于體外檢測和研究用途，開始使用前請仔細閱讀本說明書全文。
 

　　2.實驗必須嚴格分區操作：PCR前準備區一一準備實驗試劑；樣本處理區一一待測樣本、模板處理；檢測區一一PCR擴增、檢測。
 

　　3.有關實驗室管理規范請參照國家相關部門頒布的基因擴增實驗室的管理規范執行。