植物elisa試劑盒如何規范使用

　　植物elisa試劑盒基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結合，此種結合不會改變抗體的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發生特異性結合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現顏色反應。因此，可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA(酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒)檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來，使ELISA(酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒)方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

　　用于標記的酶用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室溫下穩定；反應產物易于顯現；能商品化生產。應用較多的有辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP應用廣。

　　純酶的RZ多在3.0以上，高達3.4。RZ在0.6以下的酶制品為粗酶，非酶蛋白約占75%，不能用于標記。RZ在2.5以上者方可用于標記。HRP的作用底物為過氧化氫，催化反應時的供氫體有幾種：（1）鄰苯二胺（OPD），產物為橙色，可溶性，敏感性高，吸收值在490nm，可用肉眼觀察判別，容易被濃硫酸終止反應，顏色可在數小時內不改變,是國內ELISA(酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒)中常用的一種；（2）聯大茴香胺（OD）,產物為橘黃色，吸收值在400nm，顏色較穩定；（3）5－氨基水楊酸（5－AS）：產物為深棕色，吸收值在450nm，部分溶解，敏感性較差；（4）鄰聯甲苯胺（OT）產物為藍色，吸收值在630nm，部分溶解，不穩定，不耐酸，但反應快，顏色明顯。

　　堿性磷酸酶系從小牛腸粘膜和大腸桿菌中提取，由多個同功酶組成。它們的底物種類很多，常用者為硝基苯磷酸鹽，廉價無毒性。酶解產物呈黃色，可溶，吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反應系統中，37℃1分鐘水解1μg磷酸苯二鈉為一個單位。